Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem: https://hdl.handle.net/20.500.12104/92408
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dc.contributor.authorReyes Maldonado, Oscar Kevin
dc.date.accessioned2023-06-19T18:10:47Z-
dc.date.available2023-06-19T18:10:47Z-
dc.date.issued2022-07-07
dc.identifier.urihttps://wdg.biblio.udg.mx
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/20.500.12104/92408-
dc.description.abstractLos hidrogeles son una familia de polímeros entrecruzados que tienen la capacidad de captar grandes cantidades de agua en el interior de estructura, fenómeno conocido como hinchamiento, que lleva consigo el crecimiento del polímero. Los hidrogeles son conocidos por su resistencia a la degradación y la rigidez que se genera en su estructura por el entrecruzante. Para facilitar la degradación de un hidrogel, la estrategia más utilizada es añadir un biopolímero a la estructura del polímero. Uno de los más utilizados es la lignina. La lignina es un biopolímero polifenólico, es el segundo material más abundante en el planeta. La lignina siempre ha sido tratada como un desecho sin valor comercial, ya que se obtiene como producto secundario de la producción del papel. En conjunto, la necesidad del aprovechamiento de la lignina y la de incorporar un biopolímero a los hidrogeles llevó al uso de lignina como entrecruzante de hidrogeles. Para su incorporación en un hidrogel usando una polimerización por radicales libres, la lignina debe recibir una modificación química, ya que en la polimerización con radicales se forma un radical fenoxilo que es poco reactivo y por ende, produce rendimientos bajos en la síntesis. Una estrategia para evitar este problema es proteger el grupo hidroxilo con la adición de un grupo acrílico, esta modificación hizo compatible a la lignina modificada entrecruzándola como material entrecruzante en la síntesis de un hidrogel acrílico. La adición del biopolímero a la estructura de un hidrogel requiere de un tratamiento adicional para lograr una correcta degradación. De entre los métodos de degradación, los métodos biológicos destacan por su bajo costo, rendimientos altos, y el bajo impacto ambiental que generan. Los organismos del género Streptomyces, han sido utilizados como degradadores de lignina, compuestos fenólicos y algunos polímeros, ya que poseen la capacidad de producir enzimas como las lacasas, que poseen actividad frente a todos estos sustratos. 7 El tratamiento con Streptomyces avermitilis para degradar los hidrogeles acrílicos entrecruzados con lignina modificada, después de 90 días de análisis, se logró hacer modificaciones en las propiedades del hidrogel, una de ellas fue el incremento significativo en el grado de hinchamiento debido a la disminución en el tamaño promedio del polímero, además de que este hidrogel con el tratamiento microbiano disminuyó su resistencia a la degradación térmica. El tratamiento con la lacasa SilA proveniente de Streptomyces ipomoeae, provocó un cambio en la apariencia del hidrogel, perdiendo el color amarillo característico de la lignina; además, sus propiedades cambiaron, haciéndolo prácticamente imposible de secar totalmente. Con respecto al hinchamiento, el hidrogel disminuyó significativamente su capacidad de hinchamiento y al poco tiempo de hincharse el hidrogel comenzó a degradarse. Entre ambos tratamientos, el enzimático fue el tratamiento que generó una mayor modificación a las propiedades químicas y físicas del hidrogel.
dc.description.tableofcontentsINDICE INDICE DE TABLAS ........................................................................................................ 16 INDICE DE FIGURAS ...................................................................................................... 17 1.-Antecedentes ............................................................................................................... 20 1.1 Generalidades de los polímeros ............................................................................. 20 1.1.1 Polimerización ................................................................................................. 20 1.1.2 Iniciadores ....................................................................................................... 22 1.1.3 Polímeros entrecruzados ................................................................................. 23 1.1.3.1 Agentes entrecruzantes ............................................................................. 23 1.2 Hidrogeles .............................................................................................................. 24 1.2.1 Tipos de Hidrogeles ......................................................................................... 25 1.2.2 Aplicaciones de los hidrogeles ......................................................................... 26 1.2.3 Biohidrogeles ................................................................................................... 26 1.2.3.1 Hidrogeles basados en lignina ................................................................... 26 1.3 Lignina ................................................................................................................... 27 1.3.1 Estructura de la lignina..................................................................................... 27 1.3.2 Métodos de obtención de lignina ...................................................................... 29 1.3.3 Aplicaciones de la lignina ................................................................................. 31 1.3.3.1 Modificación de lignina .............................................................................. 31 1.4 Degradación de lignina ........................................................................................... 32 1.4.1 Degradación por métodos físicos ..................................................................... 32 1.4.2 Degradación por métodos químicos ................................................................. 33 1.4.3 Degradación por métodos biológicos ............................................................... 33 1.4.3.1 Degradación enzimática ............................................................................ 34 1.4.3.1.1 Ligninas Peroxidasas .......................................................................... 34 1.4.3.1.2 Manganeso peroxidasa ....................................................................... 35 1.4.3.1.3 Peroxidasas Versátiles ........................................................................ 36 1.4.3.1.4 Peroxidasas DyP ................................................................................ 36 1.4.3.1.5 Lacasas .............................................................................................. 37 1.4.3.1.5.1 Estructura de las lacasas .............................................................. 38 1.4.3.1.5.2 Mecanismo de reacción de las lacasas ........................................ 39 1.5 Degradación microbiológica de lignina ................................................................... 40 1.5.1 Degradación por consorcios............................................................................. 40 1.5.2 Degradación por hongos .................................................................................. 40 1.5.3 Degradación por bacterias ............................................................................... 40 1.6 Streptomyces ......................................................................................................... 41 1.6.1 Características y ciclo de vida .......................................................................... 41 1.6.2 Degradación mediada por Streptomyces ......................................................... 42 1.7 Lacasas .................................................................................................................. 43 1.7.1 Degradación de lignina mediada por Lacasas .................................................. 43 1.7.2 Lacasas de Streptomyces reportadas como lignolíticas ................................... 43 1.7.3 Lacasa de Streptomyces ipomoeae ................................................................. 43 2. Justificación ................................................................................................................. 45 13 3. Hipótesis ...................................................................................................................... 46 4. Objetivos ...................................................................................................................... 46 4.1. Objetivo general .................................................................................................... 46 4.2. Objetivos específicos............................................................................................. 46 5. Materiales y métodos ................................................................................................... 47 5.1 Modificación de lignina ........................................................................................... 47 5.2 Síntesis del hidrogel ............................................................................................... 47 5.2.1 Lavado de Hidrogel .......................................................................................... 48 5.3 Técnicas de Caracterización .................................................................................. 48 5.3.1 Espectroscopía infrarroja por transformada de Fourier .................................... 49 5.3.2 Cinéticas de hinchamiento ............................................................................... 49 5.3.3 Calorimetría diferencial de barrido ................................................................... 49 5.3.4 Análisis termogravimétrico ............................................................................... 50 5.4 Degradación microbiológica ................................................................................... 50 5.4.1 Reactivación de esporas .................................................................................. 50 5.4.2 Identificación de morfología colonial ................................................................ 50 5.4.3 Mantenimiento de Streptomyces ...................................................................... 51 5.4.3.1 Mantenimiento en medio líquido ................................................................ 51 5.4.3.2 Mantenimiento en medio sólido ................................................................. 51 5.4.3.3 Conservación a largo plazo ....................................................................... 52 5.4.4 Adaptación fuente de carbono mínima ............................................................. 52 5.4.5 Prueba de degradación microbiológica ............................................................ 52 5.4.6 Caracterización de hidrogel degradado ............................................................ 53 5.5 Análisis bioinformático ............................................................................................ 53 5.5.1 Selección de enzimas candidatas .................................................................... 53 5.5.2 Modelado tridimensional .................................................................................. 54 5.5.3 Análisis filogenético ......................................................................................... 54 5.5.4 Determinación de parámetros teóricos ............................................................. 55 5.6 Producción de la enzima Sila ................................................................................. 55 5.6.1 Síntesis del gen ............................................................................................... 55 5.6.2 Células calcio competentes ............................................................................. 55 5.6.3 Transformación de cepa Top10 ....................................................................... 56 5.6.3.1 Conservación a largo plazo de clonas transformadas ................................ 56 5.6.4 Extracción de plásmido .................................................................................... 57 5.6.5 Electroforesis en gel de agarosa ...................................................................... 57 5.6.6 Subclonación en plásmido pCold ..................................................................... 58 5.6.7 Transformación de cepa BL21(DE3)pLysS ...................................................... 58 5.6.8 Inducción de la expresión de SilA .................................................................... 59 5.6.9 Purificación de la proteína SilA ........................................................................ 59 5.6.10 Diálisis ........................................................................................................... 60 5.6.11 Obtención de la forma activa de SilA ............................................................. 60 5.6.12 Electroforesis en gel de poliacrilamida ........................................................... 60 5.6.13 Cuantificación de proteínas totales ................................................................ 61 5.7 Caracterización Bioquímica .................................................................................... 62 5.7.1 Determinación de actividad enzimática ............................................................ 62 14 5.7.1.1 Determinación de pH óptimo ..................................................................... 62 5.7.1.2 Determinación de parámetros cinéticos ..................................................... 63 5.7.1.3 Estabilidad térmica contra el tiempo .......................................................... 64 5.7.1.4 Resistencia a inhibidores ........................................................................... 65 5.7.2 Determinación cualitativa de actividad frente a sustratos fenólicos .................. 66 5.7.3 Zimogramas ..................................................................................................... 66 5.8 Degradación enzimática ......................................................................................... 67 5.8.1 Pruebas de degradación enzimática ................................................................ 67 5.8.2 Caracterización de hidrogel con tratamiento enzimático .................................. 67 6. Resultados y discusión ................................................................................................ 68 6.1 Modificación de lignina ........................................................................................... 68 6.1.1 Caracterización de lignina modificada .............................................................. 69 6.2 Síntesis de hidrogel ................................................................................................ 71 6.2.1 Caracterización de hidrogel ............................................................................. 72 6.3 Degradación microbiológica ................................................................................... 76 6.3.1 Reactivación de Steptomyces .......................................................................... 76 6.3.2 Adaptación a fuente mínima de carbono .......................................................... 77 6.3.3 Pruebas de degradación microbiológica .......................................................... 79 6.3.4 Caracterización de hidrogel degradado microbiológicamente .......................... 80 6.4 Análisis bioinformático ............................................................................................ 84 6.4.1 Selección de secuencias candidatas ................................................................ 84 6.4.2 Modelado tridimensional .................................................................................. 86 6.4.3 Análisis filogenético. ........................................................................................ 88 6.4.4 Determinación de parámetros teóricos ............................................................. 90 6.5 Producción de SilA ................................................................................................. 90 6.5.1 Síntesis del Gen............................................................................................... 90 6.5.2 Extracción de plásmido .................................................................................... 91 6.5.3 Subclonación ................................................................................................... 92 6.5.4 Expresión y purificación de SilA ....................................................................... 93 6.5.5 Obtención de la forma activa de SilA ............................................................... 94 6.5.6 Electroforesis en gel de poliacrilamida ............................................................. 95 6.5.7 Cuantificación de proteínas totales .................................................................. 96 6.6 Caracterización bioquímica .................................................................................... 97 6.6.1 Determinación de pH óptimo ............................................................................ 97 6.6.2 Estabilidad térmica ........................................................................................... 98 6.6.3 Determinación de parámetros cinéticos ........................................................... 99 6.6.4 Resistencia a sales y solventes ..................................................................... 100 6.6.5 Determinación cualitativa de actividad frente a sustratos fenólicos ................ 102 6.6.6 Zimogramas ................................................................................................... 103 6.7 Pruebas de degradación enzimática ..................................................................... 105 6.7.1 Caracterización de hidrogel con tratamiento enzimático. ............................... 107 6.8 Comparación de tratamientos ............................................................................... 112 6.8.1 Espectroscopia infrarroja (FT-IR) ................................................................... 112 6.8.2 Cinéticas de hinchamiento ............................................................................. 113 6.8.3 Análisis Termogravimétrico ............................................................................ 114 6.8.4 Calorimetría diferencial de barrido. ................................................................ 115 15 7.- Conclusiones ............................................................................................................ 116 8. Bibliografía ................................................................................................................. 117 9. Anexos ....................................................................................................................... 132 9.1 Estructura química de sustratos fenólicos ............................................................ 132 9.2 Espectros infrarrojos ............................................................................................ 136 9.3 Información del marcador de peso molecular ....................................................... 140 9.4 Constancias y Artículos publicados ...................................................................... 142
dc.formatapplication/PDF
dc.language.isospa
dc.publisherBiblioteca Digital wdg.biblio
dc.publisherUniversidad de Guadalajara
dc.rights.urihttps://www.riudg.udg.mx/info/politicas.jsp
dc.subjectSusceptibilidad Microbiologica
dc.subjectSusceptibilidad Enzimatica
dc.subjectHidrogeles Acrilicos Entrecruzados
dc.subjectLignina Modificada
dc.titleEVALUACIÓN DE LA SUSCEPTIBILIDAD MICROBIOLÓGICA Y ENZIMÁTICA DE HIDROGELES ACRÍLICOS ENTRECRUZADOS CON LIGNINA MODIFICADA
dc.typeTesis de Maestría
dc.rights.holderUniversidad de Guadalajara
dc.rights.holderReyes Maldonado, Oscar Kevin
dc.coverageGUADALAJARA, JALISCO
dc.type.conacytmasterThesis
dc.degree.nameMAESTRIA EN CIENCIAS EN QUIMICA
dc.degree.departmentCUCEI
dc.degree.grantorUniversidad de Guadalajara
dc.degree.creatorMAESTRO EN CIENCIAS EN QUIMICA
dc.contributor.directorOrozco Guareño, Eulogio
dc.contributor.codirectorVelázquez Juárez, Gilberto
Aparece en las colecciones:CUCEI

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