Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem: https://hdl.handle.net/20.500.12104/90886
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dc.contributor.advisorViveros Paredes, Juan Manuel
dc.contributor.authorGonzález Díaz, Rosa Leonor
dc.date.accessioned2022-09-12T22:12:45Z-
dc.date.available2022-09-12T22:12:45Z-
dc.date.issued2022-03-28
dc.identifier.urihttps://wdg.biblio.udg.mx
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/20.500.12104/90886-
dc.description.abstractLos fructanos son un conjunto de carbohidratos de estructura química diversa que se encuentran distribuidos en diferentes phyla del árbol de la vida. Las exohidrolasas fructosílicas (FEHs) son exoenzimas que liberan secuencialmente residuos de fructosa terminales de los fructanos para hacerlos disponibles para diferentes procesos celulares. Estas enzimas se encuentran en muchas plantas de interés comercial como el Agave tequilana Weber var. azul. En el presente trabajo se identificaron genes codificantes para putativas exohidrolasas fructosílicas en Agave tequilana Weber var. azul a partir de búsquedas en bases de datos de secuencias reportadas para esta planta, obtenidas mediante análisis in silico y se analizaron las características que presentaban al compararlas con otras secuencias de hidrolasas glicosídicas reportadas en la literatura. Se encontraron dos secuencias génicas codificantes para putativas exohidrolasas fructosílicas en la planta. Tras el análisis comparativo del alineamiento obtenido, dentro de las secuencias proteicas se identificaron motivos conservados a lo largo de ellas, lo que permitió verificar que esas secuencias pertenecen a la familia de las hidrolasas glucosídicas. Con el diseño de oligonucleótidos específicos para las secuencias encontradas se obtuvieron dos fragmentos génicos correspondientes a putativas exohidrolasas fructosílicas en Agave tequilana Weber var. azul, lo que deberá ser verificado, en estudios futuros, mediante secuenciación o digestión con enzimas de restricción. Estos resultados no fueron concluyentes, pero si representaron el punto de partida para posibles investigaciones biotecnológicas sobre esta planta que tiene una gran importancia económica en el país para la producción de tequila.
dc.description.tableofcontentsDEDICATORIAS ................................................................................................................ II AGRADECIMIENTOS ....................................................................................................... III ÍNDICE GENERAL .......................................................................................................... IVI ÍNDICE DE FIGURAS ....................................................................................................... VI ÍNDICE DE TABLAS ........................................................................................................ VII LISTA DE ABREVIACIONES .......................................................................................... VIII RESUMEN ........................................................................................................................ IX ABSTRACT ....................................................................................................................... X 1.INTRODUCCIÓN ............................................................................................................ 1 2. ANTECEDENTES…………………………………………………………...................................................………………..3 2.1. Características y diversidad del géneroAgave…………………………..…..................................……………...3 2.2. Agave tequilana Weber var. azul…………………………………………..…........................................……………5 2.2.1. Producciones industriales………………….......................................…………………………………………...…..5 2.2.2. Tolerancia de la planta de agave a las condiciones ambientales……..........................……………......6 2.2.3. Análisis in silico de secuencias de diferentes especies de Agave………………...............................……7 2.2.4. Fructanos en el agave…………………………...……………………….........................................………………..7 2.3. Enzimas hidrolasas glicosídicas en plantas………………..................................………...………………...….12 2.3.1. Exohidrolasas fructosílicas (FEHs)..…………………….....................................……………………………….14 2.4. Proteínas recombinantes…………………………………........................................………………………………...17 2.4.1. Sistemas de expresión heterólogos………………......................................……………………………………18 2.4.1.1. Expresión de proteínas recombinantes en Pichia pastoris………..............................…………………19 3. JUSTIFICACIÓN ........................................................................................................... 22 4. HIPÓTESIS.................................................................................................................. 22 5. OBJETIVOS ................................................................................................................ 23 6. MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................................................. 24 6.1. Análisis de secuencias codificantes mediante el uso de base de datos……............................…...….24 6.2. Caracterización de las secuencias codificantes………………………………......................................………24 6.2.1. Alineamiento de secuencias e identificación de dominios conservados………...........................…….24 6.3. Aislamiento de genes codificantes para posibles exohidrolasas fructosílicas en Agave tequilana Weber var. azul…………………………………………………………………….....................................................................…..25 6.3.1. Colecta de los tejidos de A. tequilana…………....................................………………………………………..25 6.3.2. Extracción del ácido ribonucleico (ARN)……………....................................…………………………………..25 6.3.3. Electroforesis en geles de agarosa……………………………......................................………………………...26 6.3.5. Diseño de Oligonucleótidos………………………………………..……………........................................………..26 6.3.4. Obtención del ADNc por transcripción reversa………………………………...…..................................……26 6.3.6. Amplificación de secuencias complementarias……………………………..………..................................….26 6.3.6.1. Purificación de ADN a partir de bandas de agarosa………………................................…………..…….28 6.3.6.2. Preparación de las células competentes con Cloruro de calcio…………….............................……..28 6.3.6.3. Clonación…………………………………...………………………………….............................................…………29 6.3.6.4. Transformación de E. coli Top 10………………………....................................…………………...………...29 6.3.6.5. Extracción de plásmidos con soluciones salinas……..................................……………………………….31 6.3.7. PCR de doble unión………………………………………………............................................………………………33 6.3.7.1. PCR primera ronda………………………………………….......................................…....……………………...33 6.3.7.2. PCR segunda ronda………………………………………..........................................……..………………………33 6.3.8. Amplificación de los genes putativos codificantes para la FEH recombinante.......................……..34 7. RESULTADOS Y DISCUSIÓN………………………………………….…..............................................…………………35 7.1. Identificación de secuencias codificantes mediante el uso de base de datos….…….........................35 7.2. Particularidades de las secuencias encontradas a nivel nucleotídico y aminoacídico.......................35 7.2.1. Análisis de secuencias e identificación de dominios conservados………….…............................…….35 7.3. Obtención de genes putativos de exohidrolasas fructosílicas de A. tequilana…….........................….41 8. CONCLUSIONES………………………………………………………………………...............................................……...45 9. PERSPECTIVAS A FUTURO ............................................................................................... 46 10. BIBLIOGRAFÍA ........................................................................................................... 48 11. ANEXOS ................................................................................................................... 59
dc.formatapplication/PDF
dc.language.isospa
dc.publisherBiblioteca Digital wdg.biblio
dc.publisherUniversidad de Guadalajara
dc.rights.urihttps://www.riudg.udg.mx/info/politicas.jsp
dc.subjectFructanos
dc.subjectExohidrolasas Fructosilicas
dc.subjectAgave Tequilana Weber Var. Azul
dc.titleDeterminación de la presencia de genes putativos codificantes para Exohidrolasa Fructosílica a partir de Agave tequilana Weber var. azul
dc.title.alternativeDeterminación de la presencia de genes putativos codificantes para Exohidrolasa Fructosílica a partir de Agave tequilana Weber var. azul
dc.typeTesis de Doctorado
dc.rights.holderUniversidad de Guadalajara
dc.rights.holderGonzález Díaz, Rosa Leonor
dc.coverageGUADALAJARA, JALISCO
dc.type.conacytdoctoralThesis
dc.degree.nameDOCTORADO EN CIENCIAS EN PROCESOS BIOTECNOLOGICOS
dc.degree.departmentCUCEI
dc.degree.grantorUniversidad de Guadalajara
dc.rights.accessopenAccess
dc.degree.creatorDOCTOR EN CIENCIAS EN PROCESOS BIOTECNOLOGICOS
dc.contributor.directorRodríguez Gómez, Flor Del Carmen
dc.contributor.codirectorCortés Romero, Celso
Aparece en las colecciones:CUCEI

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