Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem: https://hdl.handle.net/20.500.12104/83481
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dc.contributor.authorIñiguez Gutiérrez, Liliana
dc.date.accessioned2021-10-02T20:57:58Z-
dc.date.available2021-10-02T20:57:58Z-
dc.date.issued2020-12-09
dc.identifier.urihttps://wdg.biblio.udg.mx
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/20.500.12104/83481-
dc.description.abstractIntroducción: Los neutrófilos son células del sistema inmune innato, representan la primera línea de defensa celular del organismo; uno de los mecanismos microbicidas que emplean éstas células es la liberación de trampas extracelulares de neutrófilos (NET, por sus siglas en inglés Neutrophil Extracellular Traps). Diversos grupos de trabajo han demostrado la asociación de la formación de NET con enfermedades inflamatorias, infecciosas y autoinmunes. Actualmente, se conocen una amplia gama de estímulos químicos y biológicos que inducen o inhiben la liberación de NET; sin embargo, se desconoce el efecto de los ácidos grasos de cadena corta (AGCC). Los AGCC se producen principalmente en la luz del colon y en concentraciones menores en otros tejidos y en circulación, donde modulan la función de diferentes células del hospedero a través de receptores asociados a proteínas G. Objetivo: Estudiar el efecto de los ácidos grasos de cadena corta sobre la formación de trampas extracelulares de neutrófilos y evaluar la participación del FFAR2 in vitro. Metodología: Los experimentos fueron realizados in vitro, con neutrófilos aislados de sangre periférica de sujetos clínicamente sanos. Utilizamos como estímulo AGCC a las concentraciones previamente reportadas en la luz del colon y en sangre periférica, en los estados fisiológicos post-prandial y basal. Evaluamos la posible vía de señalización utilizada por los AGCC para la inducción de NET, para ello probamos inhibidores del FFAR2 expresado en neutrófilos (por sus siglas en inglés Fat Free Acid Receptor 2): CATPB, que bloquea el sitio activo del receptor, y genisteína, un inhibidor de la señalización intracelular de proteínas Ga/q. Para conocer la participación los elementos intracelulares: Ca2+ y ROS utilizamos como inhibidores el quelante de calcio BATPA-AM y el inhibidor de NADPH oxidasa, DPI. Finalmente, comprobamos si elementos del microambiente influyen en la respuesta de inducción de NET por AGCC, realizamos experimentos cambiando el pH del medio de incubación y a su vez observamos el efecto de la presencia de suero autólogo inactivado.Resultados: Corroboramos la presencia del receptor en los neutrófilos de sujetos participantes tanto a nivel de ARNm como de la proteína. Paralelamente observamos, que cada uno de los AGCC a concentraciones de colon (20-60 mM) fueron capaces de inducir la formación de NET. Mientras que de las concentraciones de sangre periférica, solo el ácido acético a 100μM (equivalente en ayunas) y 700μM (equivalente postprandial) condujeron a la formación de NET. La preincubación del neutrófilos con inhibidores CATPB ó genisteína, disminuyó la liberación de NET aproximadamente en hasta un 50% (p
dc.description.tableofcontents1. ANTECEDENTES 1.1. Neutrófilos 1.1.1 Neutrófilos y mecanismos microbicidas 1.1.2 Trampas extracelulares de neutrófilos (NET) 1.2. Ácidos Grasos de Cadena Corta y NET 1.2.1 Generalidades de los AGCC 1.2.2 Expresión de FFAR2 en neutrófilos 1.2.3 Efecto directo de los AGCC en los neutrófilos mediante el receptor FFA2 1.2.4 Efecto indirecto de los AGCC en la función del neutrófilo por variaciones del pH 3. HIPÓTESIS 3. OBJETIVOS 3.1 Objetivo general 3.2 Objetivos específicos 4.5.1 Variables independientes 4.5.2 Variables dependientes 4.6.1 Criterios de inclusión 4.6.2 Criterios de exclusión 7.2 Separación de células neutrófilos de sangre periférica 7.3 Expresión del FFAR2 en neutrófilos 7.3.1 Extracción de ARN 7.3.2 PCR-RT 7.3.3 Expresión relativa del FFAR2 por qPCR 7.3.4 Expresión del FFAR2 en neutrófilos por Western Blot 7.4 Inducción de NET 7.5 Observación y cuantificación de NET 7.5.1 Microscopía de fluorescencia 7.5.2 Fluorometría 8.1 Expresión del FFAR2 8.1.1 qPCR 8.1.2 Western Blot 37 8.2 Inducción de NET 8.2.1 Inducción de NET con AGCC a concentraciones fisiológicas 8.5 Efecto del pH en la inducción de NET por ácido acético 9. DISCUSIÓN 10. BIBLIOGRAFÍA
dc.formatapplication/PDF
dc.language.isospa
dc.publisherBiblioteca Digital wdg.biblio
dc.publisherUniversidad de Guadalajara
dc.rights.urihttps://www.riudg.udg.mx/info/politicas.jsp
dc.subjectNets
dc.subjectAcidos Grasos De Cadena Corta
dc.subjectFfar
dc.titleÁcidos grasos de cadena corta estimulan la formación de trampas extracelulares de neutrófilos de sangre periférica a través de FFAR2
dc.typeTesis de Doctorado
dc.rights.holderUniversidad de Guadalajara
dc.rights.holderIñiguez Gutiérrez, Liliana
dc.coverageGUADALAJARA, JALISCO
dc.type.conacytdoctoralThesis
dc.degree.nameDOCTORADO EN CIENCIAS BIOMEDICAS
dc.degree.departmentCUCS
dc.degree.grantorUniversidad de Guadalajara
dc.degree.creatorDOCTOR EN CIENCIAS BIOMEDICAS
dc.contributor.directorDelgado Rizo, Vidal
dc.contributor.codirectorBueno Topete, Miriam Ruth
Aparece en las colecciones:CUCS

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