Modulación de la expresión de WNT7A e IL-6 por las proteínas E5, E6 y E7 de distintos virus del papiloma humano

Abstract

Introducción: La infección persistente con virus de papiloma humano (Human Papillomavirus, HPV) de alto riesgo (HR-HPVs), como HPV16 y HPV18, es el principal factor etiológico para el desarrollo del cáncer cérvico-uterino (CaCU). Los HR-HPVs, contrariamente a los de bajo riesgo, son capaces de evadir la respuesta inmune y contribuir a la transformación del queratinocito a través de la acción de sus oncoproteínas E5, E6 y E7. Además, el HPV38 es un virus cutáneo cuyas proteínas E6 y E7 contribuyen a la tumorigénesis inducida por UVB en piel. La interleucina 6 (IL-6) es una citocina pro-inflamatoria ampliamente caracterizada como pro-tumorigénica. Por otra parte, nuestro grupo de trabajo ha reportado una disminución del ligando WNT7A en células de CaCU y su papel inhibidor de la proliferación y migración. Objetivo: Evaluar la modulación de la expresión de WNT7A e IL-6 por las proteínas E5, E6 y E7 de virus del papiloma humanos de alto riesgo, de bajo riesgo y cutáneo, en un modelo de queratinocitos humanos Metodología: Se generaron queratinocitos HaCaT que expresan los genes E5, E6 o E7 de HPV16, HPV18, HPV62 o HPV84 mediante clonación e infección lentiviral. Se evaluó el efecto de cada proteína viral sobre la expresión del ligando WNT7A y la citocina IL-6 por qPCR y Western Blot. Se determinaron varias citocinas alteradas por la expresión de las proteínas E6 por microarreglo de expresión y qPCR. Se determinó la expresión de IL-6 en células HaCaT y queratinocitos primarios transducidos con HPV38-E6E7 e irradiados con UVB, y se analizó la actividad del promotor de IL-6 por ensayo de luciferasa. Resultados: Por primera vez se reportan mutaciones en los genes E6 y E7 de HPV62 y 84. Las células HaCaT transducidas con E6 de HPV16 y de HPV18 expresan transcritos cortos de E6, llamados E6*. Las proteínas virales no disminuyen la expresión de WNT7A en las células HaCaT pero la expresión de IL-6 aumenta en presencia de E6* de HR- HPVs. Además, los distintos E6 modulan genes involucrados en vías de citocinas, algunos de ellos exclusivamente por E6*. Se validó por qPCR la subexpresión de CCL17 y sobreexpresión de CCL26 en células HaCaT con E6*. Por último, E6 y E7 del virus cutáneo HPV38 colaboran con la radiación UVB para aumentar la expresión de IL-6 en queratinocitos. HPV38-E6E7 aumentan la actividad del promotor de IL-6 en células HaCaT y la inhibición de p53 en queratinocitos primarios eleva la expresión de IL-6. Conclusiones: La sobre-expresión previamente reportada de IL-6 en CaCU y cáncer de piel podría deberse a la acción de las proteínas E6* de HR-HPVs y al efecto sinérgico de la UVB y HPV38-E6E7 respectivamente. HPV38-E6E7 actúan directa o indirectamente sobre la actividad del promotor de IL-6 y p53 podría estar controlando la sobre-expresión de IL-6. La proteína viral E6 promueve un microambiente pro-inflamatorio que favorece la carcinogénesis.