Determinación de la asociación de inestabilidad de microsatélites y/o mutaciones en los genes KRAS (p.G12D y p.G13D) y BRAF (p.V600E) con el inicio temprano del cáncer colorrectal en pacientes mexicanos

Abstract

Introducción: En el cáncer colorrectal (CCR) se describen vías oncogénicas principales como la vía de inestabilidad cromosómica, donde destacan mutaciones en genes como KRAS (p.G12D y p. G13D) y BRAF (p.V600E) y la vía de inestabilidad de microsatélites. A pesar de que la incidencia de CCR aumenta con la edad, presentándose en promedio a los 60-65 años, se ha incrementado la proporción de pacientes que se diagnostican antes de los 50 años. La búsqueda de factores genéticos que se asocien con el inicio temprano del CCR es necesaria para identificar características propias de este tipo de cáncer en mexicanos. Objetivo: Determinar si existe la asociación de inestabilidad de microsatélites y de las mutaciones en los genes KRAS (p.G12D y p.G13D) y BRAF (p.V600E) con cáncer colorrectal de inicio temprano o inicio tardío en pacientes mexicanos. Metodología: Se analizaron muestras de tejido tumoral y sano adyacente a tumor de pacientes mexicanos con diagnóstico clínico e histopatológico de CCR, formando el grupo de CCR de inicio temprano (≤50 años) y un grupo de referencia (≥60 años) captados en Hospital Civil de Guadalajara “Dr. Juan I Menchaca”. Se determinó la presencia de las mutaciones KRAS p.G12D y p.G13D y BRAF p.V600E por medio de secuenciación Sanger. La inestabilidad de microsatélites se determinó mediante el análisis de 5 marcadores con el kit Type-it® Microsatellite PCR de Qiagen. Adicionalmente se realizaron modelados de la proteína KRAS con ayuda de las bases de datos Protein Data Bank, UniProt y Swiss-Pdbviewer. Resultados y Conclusiones: Se captaron 36 pacientes en el grupo de CCR de inicio temprano y 66 en el grupo de referencia. Las mutaciones del gen KRAS se presentaron asociadas al inicio temprano del cáncer colorectal, con p=0.03 para el total de mutaciones de este gen y p=0.04 para la mutación p.G13D. La mutación p.V600E del gen BRAF se identificó solo en cuatro pacientes del grupo de comparación, sin mostrar diferencias significativas entre grupos (p=0.29). Los hallazgos de MSI-L, MSI-H o MSI total tampoco estuvieron asociados con los grupos de estudio (p=0.42, p=0.27 y p=0.77, respectivamente). Al realizar los modelados de la proteína KRAS se logró identificar cambios debidos a las mutaciones p.G12D y p.G13D en las regiones Switch I, Switch II y HVR. Estos hallazgos permiten identificar frecuencias de cambios moleculares propios de mexicanos, sin embargo es necesario ampliar el estudio a mayor número de pacientes y aumentar el perfil molecular con nuevos genes y su nivel de expresión.