Purificación y caracterización bioquímica de lipasas de Penicillum commune producidas por fermentación en medio sólido

Abstract

Durante el presente trabajo un hongo psicrofilos facultativos Penicillium commune fue cultivado para la producción de lipasas mediante el sistema de Fermentación en medio sólido utilizando bagazo de caña como soporte, incubado a una temperatura de 25°C. El objetivo principal de este trabajo consistió en proponer un protocolo de extracción y purificación de la lipasa de P. commune, utilizando distintas técnicas cromatografícas así como una caracterización de la lipasa en cuestión. Se estableció la cinéticas de producción de lipasa de P. commune se encuentra a las 24 hrs correspondiente a la actividad metabólica relacionado al perfil de la producción de CO2, consumo de O2 y a la evolución de pH en los cultivos fúngicos. Las lipasas de P. commune, producidas, fueron purificadas. Dentro del protocolo de esta purificación, su utilizó una solución de Tritón X-100 (0.5%), para extraer las lipasas de los sólidos fermentados, siendo el Tritón X-100 posteriormente, removido con una resina XAD. El extracto enzimático resultante fue aplicado a una columna filtración en gel (superdex 16/60) y finalmente a una columna hidrofóbica (butil sefarosa) para la concentración y purificación de las lipasas. Finalmente, de la fracción de mayor grado de pureza obtenida a partir del extracto con actividad lipasa de P. commune, se logró detectar mediante SDS-PAGE y tinción con plata, una banda mayoritaria de una lipasa aislada de P. commune con un peso molecular (PM) de aproximado de 31 kDa, el cual corresponde al rango de PM reportado para otras lipasas de hongos filamentosos. La actividad lipasa en trioctanoina (TC8) y tributirina (TC4) de los extractos crudos de P. commune presentaron 2 óptimos de pH, uno a pH 5.5 y otro a pH 7.2 con ambos sustratos, lo que indicaría al menos la presencia de dos lipasas en dicho extracto, mientras que la temperatura óptima del extracto crudo de P. commune de 50 °C. El extracto crudo de P. commune tuvo una preferencia por cadenas medianas y largas (C:12- a C:16) de ésteres de p-nitrofenilo, siendo con C:16 donde se detectó la máxima actividad, mostrando una preferencia ligeramente diferente a la lipasa comercial de P. camembertii donde la máxima actividad fue detectada con C:18. El extracto crudo de P. commune contiene una lipasa que mantuvo alrededor del 37% de la actividad a una temperatura de 40 °C por 1.5 horas.