Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem: https://hdl.handle.net/20.500.12104/81053
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dc.contributor.advisorRamírez Anguiano, Ana Cristina
dc.contributor.advisorVelasco Ramírez, Sandra Fabiola
dc.contributor.advisorCid Hernández, Margarita
dc.contributor.authorCuriel Olague, Brenda Gisella
dc.date.accessioned2020-06-08T20:04:19Z-
dc.date.available2020-06-08T20:04:19Z-
dc.date.issued2017-02-28
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/20.500.12104/81053-
dc.identifier.urihttps://wdg.biblio.udg.mx
dc.description.abstractLa terapia fotodinámica o PDT (por su sigla en inglés Photodynamic Therapy) es una tecnología médica que usa láseres, u otras fuentes de luz visible, para activar moléculas susceptibles a este tipo de luz y de esta manera tratar diferentes enfermedades por un medio no quirúrgico y de mínima invasividad. Clínicamente este proceso consiste en administrar a los pacientes un agente fotosensibilizador AFS, o inductor de este por vía sistémica (oral o intravenosa) o tópica, y esperar el tiempo en que se acumule selectivamente en el tejido “diana” para posteriormente irradiar, con luz de longitud de onda, en la que se absorbe el agente fotosensibilizador, con la finalidad de activarlo. Los productos del proceso de activación del agente son especies reactivas de oxígeno y radicales libres citotóxicos que destruyen las células malignas o alteradas. Debido a esto se buscó una molécula capaz de producir una reacción en respuesta a la interacción de la radiación que sea capaz de ser utilizada externamente; por lo que se recurrió a la cianobacteria Arthrospira platensis la cual además de ser conocida por sus múltiples beneficios como nutracéutico, contiene diversos pigmentos, como es el caso de la clorofila A, que pueden ser utilizados como agentes fotosensibilizantes. Para obtener la clorofila A, la metodología usada para su obtención y aislamiento fue la cromatografía de columna donde se obtuvo este pigmento verde que posteriormente se caracterizó por espectroscopia UV-VIS donde se mostró dos bandas características en 420 nm y 660 nm, la siguiente caracterización fue por espectroscopia de infrarrojo donde se observan algunas señales características de la estructura de la clorofila A, ya por último se realizó la espectrometría de masas donde nos confirma que el pigmento aislado es clorofila A. Una vez ya confirmado que el pigmento aislado y caracterizado es clorofila A, este fue sometido a pruebas de fotoinactivación en la cepa Staphylococcus aureus donde se pudo demostrar la inactivación del microorganismo.
dc.description.tableofcontentsÍNDICE Página RESUMEN ................................................................................................... i DEDICATORIA ............................................................................................ iii AGRADECIMIENTOS .................................................................................. iv ABREVIATURAS ......................................................................................... v ÍNDICE ......................................................................................................... vi LISTA DE FIGURAS .................................................................................... xi LISTA DE TABLAS ..................................................................................... xv 1. INTRODUCCIÓN .................................................................................... 1 2. ANTECEDENTES ................................................................................... 4 2.1 Fototerapia, fotoquímica y TFD .......................................................... 4 2.2 Aspectos químicos de la fototerapia, fotoquimioterapia y TFD . 5 2.2.1 Primera Ley de la fotoquímica o ley Grothuss ................. 5 2.2.2 Segunda ley de la fotodinámica o ley de Stark-Einstein .. 5 2.2.3 Tipos de reacciones fotoquímicas .................................. 5 2.3 Orígenes de la TFD ................................................................. 6 2.4 Fundamentos físicos, biofísicos y tecnológicos de la TFD ............. 9 2.4.1 Fotoquímica de la TFD ..................................................... 9 2.4.2 Mecanismo Tipo I ............................................................ 9 2.4.3 Mecanismo Tipo II ........................................................... 10 2.4.4 Especies reactivas de oxígeno ........................................ 11 2.4.5 Oxigeno singulete ........................................................... 11 2.4.6 Radicales libres peróxidos y superóxidos ....................... 12 2.4.7 Oxígeno molecular ........................................................... 12 2.5 Procesos radiactivos y fototérmicos generados durante la TFD .... 12 2.5.1 Procesos No radiactivos .................................................. 12 2.5.2 Procesos Radiactivos ....................................................... 13 2.5.3 Efectos fototérmicos ........................................................ 14 2.6 Componentes básicos de la TFD: fotosensibilizadores, fuentes de luz y oxigeno .................................................................................................. 14 2.6.1 Sustancias sensible a la luz (agentes fotosensibilizadores, AFS) .................................................................................................. 14 2.6.2 Fotosensibilizadores ........................................................ 17 2.6.3 Luz visible en la aplicación de TFD ................................. 18 2.6.4 Oxigeno molecular (O2) como componente de la TFD ... 19 2.7 Mecanismos celulares y moleculares de la TFD .................................... 20 2.7.1 Muerte directa de las células ........................................... 20 2.7.1.1 Daño vascular ...................................................................... 21 2.7.1.2 Respuesta Inmune ............................................................... 21 2.7.2 Mecanismos de muerte celular activados por la TFD ..... 22 2.7.3 Muerte apoptótica en la TFD ........................................... 22 2.7.4 Daño celular .................................................................... 23 2.7.4.1 Daño mitocondrial ................................................................ 23 2.7.4.2 Daño a membrana................................................................. 23 2.7.4.3 Daño lisosomal ..................................................................... 23 2.8 Aplicaciones de la TFD en la salud ....................................................... 24 2.9 Posibles aplicaciones de la TFD ........................................................... 25 2.9.1 Candiasis oral ................................................................. 26 2.9.2 Enfermedades periodontales .......................................... 26 2.10 Bacterias Gram-positivas ................................................................. 27 2.10.1 Staphylococcus aureus .................................................. 28 2.11 Infecciones Staphylococcus aureus ............................................... 29 2.11.1 Impétigo ......................................................................... 29 2.11.2 Foliculitis, forúnculos y carbunco ................................... 30 2.11.3 Celulitis .......................................................................... 31 2.12 Agentes fotosensibilizantes ............................................................. 32 2.12.1 Naturales ....................................................................... 34 2.12.1 Porfirinas, derivados y precursores ....................................... 34 2.12.2 Clorofilas y derivados ............................................................ 36 2.13 Características de los AFS ............................................................... 37 2.14 Selectividad de los AFS .................................................................... 37 2.15 Arthrospira platensis ........................................................................ 40 3. JUSTIFICACIÓN .................................................................................... 45 4. HIPÓTESIS ............................................................................................. 46 5. OBJETIVOS ........................................................................................... 46 5.1 Objetivo general ................................................................................ 46 5.2 Objetivos específicos ........................................................................ 46 6. METODOLOGÍA ..................................................................................... 47 6.1 Cosecha ................................................................................................ 47 6.1.1 Cepa de la cianobacteria .................................................. 47 6.1.2 Sustrato (medio de cultivo) ............................................... 47 6.1.3 Cultivo de Arthrospira platensis ....................................... 47 6.1.4 Obtención de la biomasa ................................................. 47 6.1.5 Preparación de la muestra................................................ 48 6.2 Preparación del extracto de Arthrospira platensis ........................... 48 6.3 Empleo de la cromatografía de capa fina (CF): analítica para observar la presencia de pigmentos ............................................................................... 49 6.4 Empleo de la cromatografía en columna para la separación de pigmentos ………………………………………………………………………………. 50 6.5 Técnicas analíticas ..................................................................... 51 6.5.1 Caracterización química por espectroscopia ................... 51 6.5.2 Caracterización química por infrarrojo ............................ 51 6.5.3 Caracterización química por espectrometría de masas…. 52 6.6 Evaluación del efecto inhibitorio de la clorofila A en la cepa Staphylococcus aureus .................................................................................................. 52 6.6.1 Medio de cultivo Mueller Hinton ...................................... 52 6.6.2 Inoculación de la cepa Staphylococcus aureus ............... 53 6.6.3 Escala McFarland ........................................................... 53 6.6.4 Efecto inhibitorio de la clorofila A .................................... 55 7. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ............................................................... . 57 7.1 Extracción y aislamiento del pigmento de Arthrospira platensis.... 57 7.2 Estandarización del aislamiento del pigmento proveniente de Arthrospira platensis por cromatografía por capa fina …………………………………….. 58 7.3 Estandarización del aislamiento del pigmento proveniente de Arthrospira platensis por cromatografía en columna……………………………………….. 60 7.4 Caracterización química de clorofila A ....................................... 62 7.4.1 Espectroscopía UV-VIS ........................................................... 63 7.4.2 Espectroscopía de infrarrojo con transformada de Fourier (FT-IR) .......................................................................................................... 64 7.4.3 Espectrometría de masas ........................................................ 67 7.4.4 Inactivación fotodinámica de Staphylococcus aureus…………. 69 8. CONCLUSIONES ................................................................................... 76 9. BIBLIOGRAFÍA……………………………………………………………….... 77 10. ANEXOS……………………………………………………...………..……… 92
dc.formatapplication/PDF
dc.language.isospa
dc.publisherBiblioteca Digital wdg.biblio
dc.publisherUniversidad de Guadalajara
dc.rights.urihttps://www.riudg.udg.mx/info/politicas.jsp
dc.subjectPigmento
dc.subjectArthrospira Platensis
dc.subjectAgente Fotosensibilizante En Staphylococcus Aureus
dc.titleAislamiento y caracterización de un pigmento proveniente de Arthrospira platensis y su evaluación como agente fotosensibilizante en Staphylococcus aureus
dc.typeTesis de Maestria
dc.rights.holderUniversidad de Guadalajara
dc.rights.holderCuriel Olague, Brenda Gisella
dc.coverageGUADALAJARA, JALISCO
dc.type.conacytmasterThesis-
dc.degree.nameMAESTRIA EN CIENCIAS EN QUIMICA-
dc.degree.departmentCUCEI-
dc.degree.grantorUniversidad de Guadalajara-
dc.degree.creatorMAESTRA EN CIENCIAS EN QUIMICA-
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