Exploration of the non-canonical role of B7-H6, an immunoligand for the NK cell activating receptor NKp30, in proliferation, migration, and apoptosis of cervical cancer-derived cell lines

Abstract

Grandes avances se han reportado en los últimos años en el diagnóstico y tratamiento del cáncer cérvico-uterino; sin embargo, este tipo de cáncer sigue siendo uno de los más comunes en mujeres en todo el mundo. Por lo tanto, es importante considerar y reducir la incidencia del cáncer cérvico-uterino. Teniendo esto en consideración, esta tesis se centra en moléculas (por ejemplo, B7H6) implicadas en la carcinogénesis, que podrían proporcionar estrategias terapéuticas potenciales para el tratamiento del cáncer cérvico-uterino. Es sabido que B7H6, un inmunoligando activador expresado en varios tipos de células tumorales, activa a las células NK e induce su acción citotóxica, a través de la interacción con su receptor natural NKp30. Sin embargo, los efectos desencadenados por B7H6 en las células tumorales después de interactuar con NKp30 aún no han sido evaluados. En este estudio, usamos como modelo dos líneas celulares derivadas de cáncer cérvico-uterino (HeLa y SiHa) positivas a B7H6 y las estimulamos con una proteína recombinante de NKp30 soluble (sNKp30). Posteriormente, evaluamos los efectos biológicos de la adición de sNKp30 utilizando el sistema RTCA de impedancia para evaluar la proliferación celular, el método de cierre de herida para determinar la migración celular y la citometría de flujo para determinar apoptosis. En particular, observamos que la adición de sNKp30 a las líneas celulares disminuyó su proliferación y la tasa de migración, pero no tuvo efecto alguno en la apoptosis. Los efectos inhibitorios observados podrían ser mediados por el dominio intracitoplasmático de B7H6, que presenta varios motivos de señalización como un motivo ITIM, un dominio de unión a SH2 (Src homology 2) y un dominio SH3 (Src homology 3). Pero para esclarecer el papel de estos motivos de señalización en los efectos observados después de adicionar sNKp30 es necesario realizar más estudios. También observamos que la expresión de B7H6 se mantiene de manera selectiva en las líneas celulares, ya que las células negativas a B7H6 cuando se cultivaron y posteriormente se les evaluó la expresión de este ligando, se observó que recuperaron su expresión. Por su parte, algunas de las células positivas a B7H6, después de ser purificadas y cultivadas, perdieron un porcentaje de expresión de B7H6. Adicionalmente, la microscopía confocal confirmó que B7H6 se expresó en la membrana celular de las células tumorales, lo cual indirectamente sugiere que puede llevarse a cabo la interacción de B7H6 con su receptor NKp30. En virtud de que los niveles incrementados de B7H6 soluble (sB7H6) se han correlacionado con la progresión de algunos tipos de cáncer, desarrollamos un inmunosensor basado en espectroscopía Raman de superficie reforzada para detectar sB7H6 en el suero de las mujeres con cáncer cérvico-uterino. Este sensor tuvo un límite de detección de 10-14 M, el cual supera en gran medida (hasta 100 veces) el límite de detección de los kits de ELISA disponibles comercialmente. Nuestro inmunosensor supera a las técnicas analíticas disponibles en la actualidad, y podría ser un sistema novedoso y confiable para su uso como prueba de punto de atención (POCT), por lo que podría complementar la toma de decisiones terapéuticas rápidas.